Primena molekularnih metoda u dijagnostici infekcija izazvanih adenovirusima pasa

Abstract

Lančana reakcija polimeraze (PCR) je u današnje vreme jedna od najčešće korišćenih metoda u kliničkoj mikrobiologiji pri čemu naročito olakšava dijagnostiku virusnih infekcija. Adenovirusi pasa 1 i 2 (CaDV1 i 2) su srodni dvolančani DNK virusi bez spoljašnjeg omotača i predstavnici familije Adenoviridae koji ispoljavaju različit tropizam. CaDV1 se umnožava u ćelijama endotela krvnih sudova kao i parenhima jetre i bubrega, dok se CaDV2 vezuje za receptore ćelija respiratornog i crevnog epitela. Infektivni hepatitis pasa karakterišu klinički simptomi akutnog hepatitisa i posledica je infekcije adenovirusom pasa tip 1. Adenovirus pasa tip 2 izaziva respiratorno oboljenje i jedan je od patogena u sklopu kompleksa infektivnih respiratornih oboljenja pasa, odnosno infektivnog traheobronhitisa. Osim pasa, na infekciju adenovirusima prijemčivi su i divlji mesojedi koji su ujedno i rezervoari CaDV1 u prirodi. Pojava infektivnog hepatitisa u populaciji pasa je u današnje vreme retka zahvaljujući sprovođenju postupka vakcinacije. Međutim, ovo oboljenje je i dalje prisutno kod nevakcinisanih pasa, odnosno u slučajevima njihovog kontakta sa divljim mesojedima. PCR se rutinski koristi u dijagnostici adenovirusnih infekcija pasa. Navedena metoda obezbeđuje brzo dobijanje pouzdanih rezultata ispitivanja što često nije moguće primenom klasičnih virusoloških metoda, a naročito u slučajevima ispitivanja autoliziranih uzoraka tkiva divljih mesojeda. Metoda PCR, uz upotrebu parova prajmera specifičnih za visokokonzervirane fragmente E3 regiona genoma adenovirusa čijom se primenom obezbeđuje detekcija i diferencijacija CaDV1 i CaDV2, će se vršiti ispitivanjem ekstrakata DNK različitih tkiva lisica i šakala. PCR će se vršiti po uspostavljenom protokolu uz izvođenje horizontalne gel elektroforeze radi vizualizacije i analize dobijenih PCR produkata.