Molekularna karakterizacija i filogenetska analiza sojeva goveđeg herpesvirusa 1 (BHV-1) izolovanih kod goveda na teritoriji Republike Srbije

Abstract

UVOD: Goveđi herpesvirus 1 (BHV-1) pripada rodu Varicellovirus, podfamiliji Alphaherpesvirinae i familiji Herpesviridae. Kod goveda izaziva infektivni goveđi rinotraheitis, odnosno infektivni pustulozni vulvovaginitis. Virus izaziva značajne ekonomske štete u govedarstvu. CILJ: Cilj ispitivanja je bila molekularna detekcija i karakterizacija sojeva BHV-1 izolovanih kod goveda na teritoriji Republike Srbije i upoređivanje dobijenih sekvenci sa analognim sekvencama sojeva BHV-1 iz drugih geografskih regiona. METOD: Ispitano je 110 uzoraka nosnih briseva poreklom od nevakcinisanih goveda iz različitih regiona u Republici Srbiji. Izolacija i identifikacija virusa BHV-1 vršena je korišćenjem ćelijske linije Vero. Metoda PCR je izvođena uz korišćenje prajmera za delove gena koji kodiraju sintezu glikoproteina B (gB) i timidin-kinaze (TK) BHV-1. Određivanje redosleda nukleotida dela TK i gB gena BHV-1 je vršena metodom direktnog sekvenciranja po Sanger-u, a dobijene nukleotidne sekvence su upoređivane sa analognim sekvencama delova prethodno navedenih gena referentnih i izolovanih sojeva BHV-1 dostupnih u banci gena (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/). REZULTAT: Primenom metoda izolacije virusa i PCR, utvrđeno je prisustvo BHV-1 kod četiri uzorka nosnih briseva goveda. Filogenetska analiza dela gB gena je pokazala da su nukleotidne sekvence sojeva BHV-1 poreklom iz Srbije grupisane zajedno sa sojevima virusa poreklom iz Egipta i SAD. Nukleotidne sekvence dela TK gena četiri izolovana soja BHV-1 poreklom iz Srbije su međusobno imale visok stepen sličnosti i grupisane su zajedno na filogenetskom stablu, odnosno sa sojevima virusa poreklom iz SAD i Australije. ZAKLJUČAK: Dobijeni rezultati su pokazali visok stepen sličnosti između sojeva BHV-1 poreklom iz Srbije i sojeva navedenog virusa poreklom iz drugih delova sveta. Pored toga, rezultati navedenih ispitivanja su ukazali na potrebu daljih opsežnijih istraživanja koja bi imala za cilj utvrđivanje prevalencije i molekularnih karakteristika sojeva BHV-1 kod goveda na teritoriji Republike Srbije.

INTRODUCTION: Bovine herpesvirus 1 (BHV-1) is a member of the genus Varicellovirus of the Alphaherpesvirinae subfamily and Herpesviridae family. It is an important bovine pathogen causing infectious bovine rinotracheitis and infectious pustular vulvovaginitis and leads to major economic losses in the cattle industry. AIM: Molecular detection and characterization of BHV-1 strains isolated from cattle originating from The Republic of Serbia and the comparison of obtained sequences with viral sequences from other geographic regions. METHOD: A total of 110 nasal swabs from non-vaccinated animals raised in different regions of Serbia were examined. Vero cell line was used for virus isolation and identification. PCR was performed using primers for the parts of the BHV-1 genome coding the synthesis of glycoprotein B (gB) and thymidine kinase (TK). Partial sequencing of glycoprotein B (gB) and thymidine kinase (TK) genes of BHV-1 was performed according to Sanger sequencing method and the obtained nucleotide sequences were compared to analogous sequences of the mentioned genes available in GenBank database (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/). RESULT: BHV-1 was detected in four samples using virus isolation and PCR. The phylogenetic analysis of partial glycoprotein B (gB) gene nucleotide sequences of all four BHV-1 strains showed the clustering with BHV-1 strains isolated in Egypt and USA. Partial TK gene nucleotide sequences of Serbian BHV-1 strains were highly similar and grouped together in one branch along with BHV- 1 strains from USA and Australia. CONCLUSION: The obtained results showed a high level of similarity between BHV-1 strains from Serbia and other parts of the world. Moreover, these results provide a prerequisite for further detailed investigations aimed to establish the prevalence and molecular characteristics of BHV-1 strains in The Republic of Serbia.