PCR dijagnostika nekih vrsta virusa kod divljih životinja. Primena PCR u otkrivanju gena rezistencije bakterija na fluorohinolone

Abstract

Lančana reakcija polimeraze (PCR) u današnje vreme predstavlja nezaobilaznu proceduru u većini mikrobioloških laboratorija, a našla je primenu kako u bakteriološkoj, tako i u virusološkoj dijagnostici. Prilikom ispitivanja osetljivosti bakterija na antibiotike, PCR dopunjuje klasične metode i pruža mogućnost istovremenog ispitivanja prisustva više genetskih determinanti rezistencije. PCR olakšava virusološku dijagnostiku kroz pravovremeno i pouzdano dobijanje rezultata ispitivanja, što često nije moguće primenom standardnih metoda. Fluorohinoloni su antibiotici širokog spektra delovanja sa baktericidnim delovanjem i često se upotrebljavaju u veterinarskoj medicini. Jedan od mehanizama sticanja rezistencije bakterija na fluorohinolone je putem gena u okviru plazmida koji kodiraju sintezu qnr (quinolone resistance) proteina. Tri najvažnije grupe qnr gena (qnrA, qnrB i qnrS) se mogu istovremeno detektovati primenom multiplex PCR. Divlje svinje i šakali su rasprostranjene vrste divljači i rezervoari značajnih virusa među kojima su i različiti cirkovirusi i parvovirusi. Metoda PCR u cilju detekcije svinjskog cirkovirusa 2, svinjskih parvovirusa (PPV1-PPV4), cirkovirusa i parvovirusa pasa će se vršiti ispitivanjem ekstrakata DNK različitih tkiva divljači, dok će se metoda multiplex PCR u cilju identifikacije qnr gena vršiti korišćenjem ekstrahovane DNK bakterija iz familije Enterobacteriaceae. PCR će se vršiti po unapred uspostavljenim protokolima uz izvođenje horizontalne gel elektroforeze radi vizuelizacije i analize dobijenih PCR produkata.