Ispitivanje imunskog odgovora i prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi nakon vakcinacije atenuiranom vakcinom
Аутори
Milovanoviić, Milovan M.Остала ауторства
Radojičić, SonjaMilićević, Vesna
Valčić, Miroslav
Nišavić, Jakov
Докторска теза (Објављена верзија)
Метаподаци
Приказ свих података о документуАпстракт
Nodularni dermatitis (ND) je akutno, subakutno ili hronično virusno oboljenje goveda i
bivola. Prvi slučaj nodularnog dermatitisa u Srbiji je laboratorijski potvrđen 07.06.2016. godine.
Najviše žarišta je bilo registrovano u Pčinjskom okrugu. Za sprečavanje širenja bolesti, celokupna
populacija goveda je vakcinisana živom atenuiranom vakcinom od Neethling soja (OBP,
Južnoafrička Republika). Cilj ove doktorske disertacije je ispitivanje aktivno i pasivno stečenog
imunskog odgovora protiv virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi metodom
virus neutralizacionog testa (VNT), tehnikom indirektne imunofluorescencije (IFAT) i
komercijalnim ID Screen® Capripox double antigen Multi-species-ELISA testom proizvođača IDvet
(Monpelje, Francuska). Pored seroloških ispitivanja, kod vakcinisanih životinja ispitivano je i
prisustvo vakcinalnog i terenskog soja virusa metodom Real-Time PCR.
Materijal za ispitivanje je sakupljen na teritoriji opštine Kraljevo u selu Vrdila, g...de nije bilo
prijavljenih slučajeva nodularnog dermatitisa. Uzorkovanje je sprovedeno tri puta u toku 2017.
godine i to pre revakcinacije, mesec dana nakon revakcinacije i pet meseci nakon revakcinacije. Za
ispitivanja aktivnog imunskog odgovora krvni serumi su sakupljeni od 79 životinja pre i mesec dana
nakon revakcinacije i od 74 životinje pet meseci nakon revakcinacije. Za utvrđivanje specifičnosti
ELISA testa ispitani su krvni serumi od 20 svinja seropozitivnih na Suipoxvirus. Pasivni imunski
odgovor je ispitan pregledom krvnog seruma i kolostruma od 17 krava (na dan teljenja) i krvnog
seruma od 20 teladi (0. i 14. dana starosti). Za ispitivanje karakteristika ELISA testa za ispitivanje
mleka sakupljeno je pojedinačno i zbirno mleko od krava u laktaciji i to od 52 krave sa 12
gazdinstava pre revakcinacije, od 49 krava sa 11 gazdinstava mesec dana nakon revakcinacije i od 53
krave sa 15 gazdinstava pet meseci nakon revakcinacije. Kao negativna kontrola u cilju validacije
ELISA testa ispitano je mleko od 352 krave sa teritorije Savezne Republike Nemačke. Za detekciju
prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa prikupljena je krv sa EDTA od životinja odabranih za
ispitivanje aktivnog i pasivnog imunskog odgovora, bris nosa i bris usta od životinja odabranih za
ispitivanje aktivnog imunskog odgovora i hematofagni insekti sa 20 farmi odabranih za ispitivanje
aktivnog imunskog odgovora (uzorkovani 4 puta tokom perioda ispitivanja).
Specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa su dokazana 46/47 nedelja nakon
vakcinacije kod 27 životinja (35,06%) korišćenjem virus neutralizacionog testa i kod 26 životinja
(33,77%) testom indirektne imunofluorescencije i ELISA testom. Iako su posle revakcinacije broj
pozitivnih životinja i titar antitela porasli, kod jednog broja životinja nije došlo do serokonverzije.
Rezultati virus neutralizacionog testa su korišćeni za izračunavanje osetljivosti i specifičnosti
ELISA testa i testa indirektne imunofluorescencije. Osetljivost ELISA test je iznosila 91%, a
specifičnost 87% dok su karakteristike testa indirektne imunofluorescencije 85% osetljivost i 86%
specifičnost. Niže vrednosti ELISA testa dobijene su poređenjem sa rezultatima dobijenim testom
indirektne imunofluorescencije i iznosile su osetljivost 88%, a specifičnost 76%.
Krvni serumi svinja seropozitivnih na Suipoxvirus reagovali su negativno na ELISA testu, a
detektovane S/P% vrednosti su iznosile 0 i 1.
Isptivanjem kolostruma ELISA testom, u 52,94% uzoraka je utvrđeno prisustvo specifičnih
antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa. Kod 81,82% teladi čije su majke imale antitela u
kolostrumu, 14. dana starosti detektovana su antitela u krvnom serumu komercijalnim ELISA
testom.
Ispitivanje uzoraka mleka ELISA testom rađeno je korišćenjem protokola proizvođača za
krvni serum i plazmu i modifikacijom protokola. Za postavljeni uslov maksimalne specifičnosti,
najoptimalnija S/P% granična vrednost za ispitane uzorke mleka je bila ≥10. Korišćenjem ove
granične vrednosti osetljivost ELISA testa je iznosila 51% protokolom proizvođača i 63%
modifikovanim protokolom. U 99,4% uzoraka mleka krava poreklom iz Savezne Republike
Nemačke nisu dokazana specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa.
Metodom Real-Time PCR u ispitanim uzorcima nije ustanovljeno prisustvo genoma
vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa.
Prema rezultatima dobijenim u ovoj studiji detekcija specifičnih antitela protiv virusa
nodularnog dermatitisa je moguća 46/47 nedelja nakon vakcinacije. Pored određenog broja
seronegativnih životinja nakon revakcinacije je uočen pozitivni efekat revakcinacije. Za ispitivanje
aktivnog i pasivnog imunskog odgovora ELISA test se najbolje pokazao. Pored toga što je
komercijalni ELISA test namenjen za detekciju specifičnih antitela protiv virusa nodularnog
dermatitisa iz krvnih seruma i plazme, sa uspehom su detektovana i specifična antitela protiv virusa
nodularnog dermatitisa u mleku i kolostrumu. Odsustvo detekcije nukleinske kiseline vakcinalnog i
terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa dodatno opravdava primenu vakcinalne kampanje.
Кључне речи:
aktivni imunski odgovor / pasivni imunski odgovor / virus neutralizacioni test / test indirektne imunofluorescencije / ELISA test / nodularni dermatitis / serum / mleko / kolostrumИзвор:
2019, 2019Издавач:
- Univerzitet u Beogradu, Fakultet veterinarske medicine
Колекције
Институција/група
Fakultet veterinarske medicineTY - THES AU - Milovanoviić, Milovan M. PY - 2019 UR - https://vet-erinar.vet.bg.ac.rs/handle/123456789/3378 AB - Nodularni dermatitis (ND) je akutno, subakutno ili hronično virusno oboljenje goveda i bivola. Prvi slučaj nodularnog dermatitisa u Srbiji je laboratorijski potvrđen 07.06.2016. godine. Najviše žarišta je bilo registrovano u Pčinjskom okrugu. Za sprečavanje širenja bolesti, celokupna populacija goveda je vakcinisana živom atenuiranom vakcinom od Neethling soja (OBP, Južnoafrička Republika). Cilj ove doktorske disertacije je ispitivanje aktivno i pasivno stečenog imunskog odgovora protiv virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi metodom virus neutralizacionog testa (VNT), tehnikom indirektne imunofluorescencije (IFAT) i komercijalnim ID Screen® Capripox double antigen Multi-species-ELISA testom proizvođača IDvet (Monpelje, Francuska). Pored seroloških ispitivanja, kod vakcinisanih životinja ispitivano je i prisustvo vakcinalnog i terenskog soja virusa metodom Real-Time PCR. Materijal za ispitivanje je sakupljen na teritoriji opštine Kraljevo u selu Vrdila, gde nije bilo prijavljenih slučajeva nodularnog dermatitisa. Uzorkovanje je sprovedeno tri puta u toku 2017. godine i to pre revakcinacije, mesec dana nakon revakcinacije i pet meseci nakon revakcinacije. Za ispitivanja aktivnog imunskog odgovora krvni serumi su sakupljeni od 79 životinja pre i mesec dana nakon revakcinacije i od 74 životinje pet meseci nakon revakcinacije. Za utvrđivanje specifičnosti ELISA testa ispitani su krvni serumi od 20 svinja seropozitivnih na Suipoxvirus. Pasivni imunski odgovor je ispitan pregledom krvnog seruma i kolostruma od 17 krava (na dan teljenja) i krvnog seruma od 20 teladi (0. i 14. dana starosti). Za ispitivanje karakteristika ELISA testa za ispitivanje mleka sakupljeno je pojedinačno i zbirno mleko od krava u laktaciji i to od 52 krave sa 12 gazdinstava pre revakcinacije, od 49 krava sa 11 gazdinstava mesec dana nakon revakcinacije i od 53 krave sa 15 gazdinstava pet meseci nakon revakcinacije. Kao negativna kontrola u cilju validacije ELISA testa ispitano je mleko od 352 krave sa teritorije Savezne Republike Nemačke. Za detekciju prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa prikupljena je krv sa EDTA od životinja odabranih za ispitivanje aktivnog i pasivnog imunskog odgovora, bris nosa i bris usta od životinja odabranih za ispitivanje aktivnog imunskog odgovora i hematofagni insekti sa 20 farmi odabranih za ispitivanje aktivnog imunskog odgovora (uzorkovani 4 puta tokom perioda ispitivanja). Specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa su dokazana 46/47 nedelja nakon vakcinacije kod 27 životinja (35,06%) korišćenjem virus neutralizacionog testa i kod 26 životinja (33,77%) testom indirektne imunofluorescencije i ELISA testom. Iako su posle revakcinacije broj pozitivnih životinja i titar antitela porasli, kod jednog broja životinja nije došlo do serokonverzije. Rezultati virus neutralizacionog testa su korišćeni za izračunavanje osetljivosti i specifičnosti ELISA testa i testa indirektne imunofluorescencije. Osetljivost ELISA test je iznosila 91%, a specifičnost 87% dok su karakteristike testa indirektne imunofluorescencije 85% osetljivost i 86% specifičnost. Niže vrednosti ELISA testa dobijene su poređenjem sa rezultatima dobijenim testom indirektne imunofluorescencije i iznosile su osetljivost 88%, a specifičnost 76%. Krvni serumi svinja seropozitivnih na Suipoxvirus reagovali su negativno na ELISA testu, a detektovane S/P% vrednosti su iznosile 0 i 1. Isptivanjem kolostruma ELISA testom, u 52,94% uzoraka je utvrđeno prisustvo specifičnih antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa. Kod 81,82% teladi čije su majke imale antitela u kolostrumu, 14. dana starosti detektovana su antitela u krvnom serumu komercijalnim ELISA testom. Ispitivanje uzoraka mleka ELISA testom rađeno je korišćenjem protokola proizvođača za krvni serum i plazmu i modifikacijom protokola. Za postavljeni uslov maksimalne specifičnosti, najoptimalnija S/P% granična vrednost za ispitane uzorke mleka je bila ≥10. Korišćenjem ove granične vrednosti osetljivost ELISA testa je iznosila 51% protokolom proizvođača i 63% modifikovanim protokolom. U 99,4% uzoraka mleka krava poreklom iz Savezne Republike Nemačke nisu dokazana specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa. Metodom Real-Time PCR u ispitanim uzorcima nije ustanovljeno prisustvo genoma vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa. Prema rezultatima dobijenim u ovoj studiji detekcija specifičnih antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa je moguća 46/47 nedelja nakon vakcinacije. Pored određenog broja seronegativnih životinja nakon revakcinacije je uočen pozitivni efekat revakcinacije. Za ispitivanje aktivnog i pasivnog imunskog odgovora ELISA test se najbolje pokazao. Pored toga što je komercijalni ELISA test namenjen za detekciju specifičnih antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa iz krvnih seruma i plazme, sa uspehom su detektovana i specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa u mleku i kolostrumu. Odsustvo detekcije nukleinske kiseline vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa dodatno opravdava primenu vakcinalne kampanje. PB - Univerzitet u Beogradu, Fakultet veterinarske medicine T2 - 2019 T1 - Ispitivanje imunskog odgovora i prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi nakon vakcinacije atenuiranom vakcinom UR - https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_veterinar_3378 ER -
@phdthesis{ author = "Milovanoviić, Milovan M.", year = "2019", abstract = "Nodularni dermatitis (ND) je akutno, subakutno ili hronično virusno oboljenje goveda i bivola. Prvi slučaj nodularnog dermatitisa u Srbiji je laboratorijski potvrđen 07.06.2016. godine. Najviše žarišta je bilo registrovano u Pčinjskom okrugu. Za sprečavanje širenja bolesti, celokupna populacija goveda je vakcinisana živom atenuiranom vakcinom od Neethling soja (OBP, Južnoafrička Republika). Cilj ove doktorske disertacije je ispitivanje aktivno i pasivno stečenog imunskog odgovora protiv virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi metodom virus neutralizacionog testa (VNT), tehnikom indirektne imunofluorescencije (IFAT) i komercijalnim ID Screen® Capripox double antigen Multi-species-ELISA testom proizvođača IDvet (Monpelje, Francuska). Pored seroloških ispitivanja, kod vakcinisanih životinja ispitivano je i prisustvo vakcinalnog i terenskog soja virusa metodom Real-Time PCR. Materijal za ispitivanje je sakupljen na teritoriji opštine Kraljevo u selu Vrdila, gde nije bilo prijavljenih slučajeva nodularnog dermatitisa. Uzorkovanje je sprovedeno tri puta u toku 2017. godine i to pre revakcinacije, mesec dana nakon revakcinacije i pet meseci nakon revakcinacije. Za ispitivanja aktivnog imunskog odgovora krvni serumi su sakupljeni od 79 životinja pre i mesec dana nakon revakcinacije i od 74 životinje pet meseci nakon revakcinacije. Za utvrđivanje specifičnosti ELISA testa ispitani su krvni serumi od 20 svinja seropozitivnih na Suipoxvirus. Pasivni imunski odgovor je ispitan pregledom krvnog seruma i kolostruma od 17 krava (na dan teljenja) i krvnog seruma od 20 teladi (0. i 14. dana starosti). Za ispitivanje karakteristika ELISA testa za ispitivanje mleka sakupljeno je pojedinačno i zbirno mleko od krava u laktaciji i to od 52 krave sa 12 gazdinstava pre revakcinacije, od 49 krava sa 11 gazdinstava mesec dana nakon revakcinacije i od 53 krave sa 15 gazdinstava pet meseci nakon revakcinacije. Kao negativna kontrola u cilju validacije ELISA testa ispitano je mleko od 352 krave sa teritorije Savezne Republike Nemačke. Za detekciju prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa prikupljena je krv sa EDTA od životinja odabranih za ispitivanje aktivnog i pasivnog imunskog odgovora, bris nosa i bris usta od životinja odabranih za ispitivanje aktivnog imunskog odgovora i hematofagni insekti sa 20 farmi odabranih za ispitivanje aktivnog imunskog odgovora (uzorkovani 4 puta tokom perioda ispitivanja). Specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa su dokazana 46/47 nedelja nakon vakcinacije kod 27 životinja (35,06%) korišćenjem virus neutralizacionog testa i kod 26 životinja (33,77%) testom indirektne imunofluorescencije i ELISA testom. Iako su posle revakcinacije broj pozitivnih životinja i titar antitela porasli, kod jednog broja životinja nije došlo do serokonverzije. Rezultati virus neutralizacionog testa su korišćeni za izračunavanje osetljivosti i specifičnosti ELISA testa i testa indirektne imunofluorescencije. Osetljivost ELISA test je iznosila 91%, a specifičnost 87% dok su karakteristike testa indirektne imunofluorescencije 85% osetljivost i 86% specifičnost. Niže vrednosti ELISA testa dobijene su poređenjem sa rezultatima dobijenim testom indirektne imunofluorescencije i iznosile su osetljivost 88%, a specifičnost 76%. Krvni serumi svinja seropozitivnih na Suipoxvirus reagovali su negativno na ELISA testu, a detektovane S/P% vrednosti su iznosile 0 i 1. Isptivanjem kolostruma ELISA testom, u 52,94% uzoraka je utvrđeno prisustvo specifičnih antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa. Kod 81,82% teladi čije su majke imale antitela u kolostrumu, 14. dana starosti detektovana su antitela u krvnom serumu komercijalnim ELISA testom. Ispitivanje uzoraka mleka ELISA testom rađeno je korišćenjem protokola proizvođača za krvni serum i plazmu i modifikacijom protokola. Za postavljeni uslov maksimalne specifičnosti, najoptimalnija S/P% granična vrednost za ispitane uzorke mleka je bila ≥10. Korišćenjem ove granične vrednosti osetljivost ELISA testa je iznosila 51% protokolom proizvođača i 63% modifikovanim protokolom. U 99,4% uzoraka mleka krava poreklom iz Savezne Republike Nemačke nisu dokazana specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa. Metodom Real-Time PCR u ispitanim uzorcima nije ustanovljeno prisustvo genoma vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa. Prema rezultatima dobijenim u ovoj studiji detekcija specifičnih antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa je moguća 46/47 nedelja nakon vakcinacije. Pored određenog broja seronegativnih životinja nakon revakcinacije je uočen pozitivni efekat revakcinacije. Za ispitivanje aktivnog i pasivnog imunskog odgovora ELISA test se najbolje pokazao. Pored toga što je komercijalni ELISA test namenjen za detekciju specifičnih antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa iz krvnih seruma i plazme, sa uspehom su detektovana i specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa u mleku i kolostrumu. Odsustvo detekcije nukleinske kiseline vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa dodatno opravdava primenu vakcinalne kampanje.", publisher = "Univerzitet u Beogradu, Fakultet veterinarske medicine", journal = "2019", title = "Ispitivanje imunskog odgovora i prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi nakon vakcinacije atenuiranom vakcinom", url = "https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_veterinar_3378" }
Milovanoviić, M. M.. (2019). Ispitivanje imunskog odgovora i prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi nakon vakcinacije atenuiranom vakcinom. in 2019 Univerzitet u Beogradu, Fakultet veterinarske medicine.. https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_veterinar_3378
Milovanoviić MM. Ispitivanje imunskog odgovora i prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi nakon vakcinacije atenuiranom vakcinom. in 2019. 2019;. https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_veterinar_3378 .
Milovanoviić, Milovan M., "Ispitivanje imunskog odgovora i prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi nakon vakcinacije atenuiranom vakcinom" in 2019 (2019), https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_veterinar_3378 .