Ispitivanje imunskog odgovora i prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi nakon vakcinacije atenuiranom vakcinom
Authors
Milovanoviić, Milovan M.Contributors
Radojičić, SonjaMilićević, Vesna
Valčić, Miroslav
Nišavić, Jakov
Doctoral thesis (Published version)
Metadata
Show full item recordAbstract
Nodularni dermatitis (ND) je akutno, subakutno ili hronično virusno oboljenje goveda i
bivola. Prvi slučaj nodularnog dermatitisa u Srbiji je laboratorijski potvrđen 07.06.2016. godine.
Najviše žarišta je bilo registrovano u Pčinjskom okrugu. Za sprečavanje širenja bolesti, celokupna
populacija goveda je vakcinisana živom atenuiranom vakcinom od Neethling soja (OBP,
Južnoafrička Republika). Cilj ove doktorske disertacije je ispitivanje aktivno i pasivno stečenog
imunskog odgovora protiv virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi metodom
virus neutralizacionog testa (VNT), tehnikom indirektne imunofluorescencije (IFAT) i
komercijalnim ID Screen® Capripox double antigen Multi-species-ELISA testom proizvođača IDvet
(Monpelje, Francuska). Pored seroloških ispitivanja, kod vakcinisanih životinja ispitivano je i
prisustvo vakcinalnog i terenskog soja virusa metodom Real-Time PCR.
Materijal za ispitivanje je sakupljen na teritoriji opštine Kraljevo u selu Vrdila, g...de nije bilo
prijavljenih slučajeva nodularnog dermatitisa. Uzorkovanje je sprovedeno tri puta u toku 2017.
godine i to pre revakcinacije, mesec dana nakon revakcinacije i pet meseci nakon revakcinacije. Za
ispitivanja aktivnog imunskog odgovora krvni serumi su sakupljeni od 79 životinja pre i mesec dana
nakon revakcinacije i od 74 životinje pet meseci nakon revakcinacije. Za utvrđivanje specifičnosti
ELISA testa ispitani su krvni serumi od 20 svinja seropozitivnih na Suipoxvirus. Pasivni imunski
odgovor je ispitan pregledom krvnog seruma i kolostruma od 17 krava (na dan teljenja) i krvnog
seruma od 20 teladi (0. i 14. dana starosti). Za ispitivanje karakteristika ELISA testa za ispitivanje
mleka sakupljeno je pojedinačno i zbirno mleko od krava u laktaciji i to od 52 krave sa 12
gazdinstava pre revakcinacije, od 49 krava sa 11 gazdinstava mesec dana nakon revakcinacije i od 53
krave sa 15 gazdinstava pet meseci nakon revakcinacije. Kao negativna kontrola u cilju validacije
ELISA testa ispitano je mleko od 352 krave sa teritorije Savezne Republike Nemačke. Za detekciju
prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa prikupljena je krv sa EDTA od životinja odabranih za
ispitivanje aktivnog i pasivnog imunskog odgovora, bris nosa i bris usta od životinja odabranih za
ispitivanje aktivnog imunskog odgovora i hematofagni insekti sa 20 farmi odabranih za ispitivanje
aktivnog imunskog odgovora (uzorkovani 4 puta tokom perioda ispitivanja).
Specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa su dokazana 46/47 nedelja nakon
vakcinacije kod 27 životinja (35,06%) korišćenjem virus neutralizacionog testa i kod 26 životinja
(33,77%) testom indirektne imunofluorescencije i ELISA testom. Iako su posle revakcinacije broj
pozitivnih životinja i titar antitela porasli, kod jednog broja životinja nije došlo do serokonverzije.
Rezultati virus neutralizacionog testa su korišćeni za izračunavanje osetljivosti i specifičnosti
ELISA testa i testa indirektne imunofluorescencije. Osetljivost ELISA test je iznosila 91%, a
specifičnost 87% dok su karakteristike testa indirektne imunofluorescencije 85% osetljivost i 86%
specifičnost. Niže vrednosti ELISA testa dobijene su poređenjem sa rezultatima dobijenim testom
indirektne imunofluorescencije i iznosile su osetljivost 88%, a specifičnost 76%.
Krvni serumi svinja seropozitivnih na Suipoxvirus reagovali su negativno na ELISA testu, a
detektovane S/P% vrednosti su iznosile 0 i 1.
Isptivanjem kolostruma ELISA testom, u 52,94% uzoraka je utvrđeno prisustvo specifičnih
antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa. Kod 81,82% teladi čije su majke imale antitela u
kolostrumu, 14. dana starosti detektovana su antitela u krvnom serumu komercijalnim ELISA
testom.
Ispitivanje uzoraka mleka ELISA testom rađeno je korišćenjem protokola proizvođača za
krvni serum i plazmu i modifikacijom protokola. Za postavljeni uslov maksimalne specifičnosti,
najoptimalnija S/P% granična vrednost za ispitane uzorke mleka je bila ≥10. Korišćenjem ove
granične vrednosti osetljivost ELISA testa je iznosila 51% protokolom proizvođača i 63%
modifikovanim protokolom. U 99,4% uzoraka mleka krava poreklom iz Savezne Republike
Nemačke nisu dokazana specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa.
Metodom Real-Time PCR u ispitanim uzorcima nije ustanovljeno prisustvo genoma
vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa.
Prema rezultatima dobijenim u ovoj studiji detekcija specifičnih antitela protiv virusa
nodularnog dermatitisa je moguća 46/47 nedelja nakon vakcinacije. Pored određenog broja
seronegativnih životinja nakon revakcinacije je uočen pozitivni efekat revakcinacije. Za ispitivanje
aktivnog i pasivnog imunskog odgovora ELISA test se najbolje pokazao. Pored toga što je
komercijalni ELISA test namenjen za detekciju specifičnih antitela protiv virusa nodularnog
dermatitisa iz krvnih seruma i plazme, sa uspehom su detektovana i specifična antitela protiv virusa
nodularnog dermatitisa u mleku i kolostrumu. Odsustvo detekcije nukleinske kiseline vakcinalnog i
terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa dodatno opravdava primenu vakcinalne kampanje.
Keywords:
aktivni imunski odgovor / pasivni imunski odgovor / virus neutralizacioni test / test indirektne imunofluorescencije / ELISA test / nodularni dermatitis / serum / mleko / kolostrumSource:
2019, 2019Publisher:
- Univerzitet u Beogradu, Fakultet veterinarske medicine
Collections
Institution/Community
Fakultet veterinarske medicineTY - THES AU - Milovanoviić, Milovan M. PY - 2019 UR - https://vet-erinar.vet.bg.ac.rs/handle/123456789/3378 AB - Nodularni dermatitis (ND) je akutno, subakutno ili hronično virusno oboljenje goveda i bivola. Prvi slučaj nodularnog dermatitisa u Srbiji je laboratorijski potvrđen 07.06.2016. godine. Najviše žarišta je bilo registrovano u Pčinjskom okrugu. Za sprečavanje širenja bolesti, celokupna populacija goveda je vakcinisana živom atenuiranom vakcinom od Neethling soja (OBP, Južnoafrička Republika). Cilj ove doktorske disertacije je ispitivanje aktivno i pasivno stečenog imunskog odgovora protiv virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi metodom virus neutralizacionog testa (VNT), tehnikom indirektne imunofluorescencije (IFAT) i komercijalnim ID Screen® Capripox double antigen Multi-species-ELISA testom proizvođača IDvet (Monpelje, Francuska). Pored seroloških ispitivanja, kod vakcinisanih životinja ispitivano je i prisustvo vakcinalnog i terenskog soja virusa metodom Real-Time PCR. Materijal za ispitivanje je sakupljen na teritoriji opštine Kraljevo u selu Vrdila, gde nije bilo prijavljenih slučajeva nodularnog dermatitisa. Uzorkovanje je sprovedeno tri puta u toku 2017. godine i to pre revakcinacije, mesec dana nakon revakcinacije i pet meseci nakon revakcinacije. Za ispitivanja aktivnog imunskog odgovora krvni serumi su sakupljeni od 79 životinja pre i mesec dana nakon revakcinacije i od 74 životinje pet meseci nakon revakcinacije. Za utvrđivanje specifičnosti ELISA testa ispitani su krvni serumi od 20 svinja seropozitivnih na Suipoxvirus. Pasivni imunski odgovor je ispitan pregledom krvnog seruma i kolostruma od 17 krava (na dan teljenja) i krvnog seruma od 20 teladi (0. i 14. dana starosti). Za ispitivanje karakteristika ELISA testa za ispitivanje mleka sakupljeno je pojedinačno i zbirno mleko od krava u laktaciji i to od 52 krave sa 12 gazdinstava pre revakcinacije, od 49 krava sa 11 gazdinstava mesec dana nakon revakcinacije i od 53 krave sa 15 gazdinstava pet meseci nakon revakcinacije. Kao negativna kontrola u cilju validacije ELISA testa ispitano je mleko od 352 krave sa teritorije Savezne Republike Nemačke. Za detekciju prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa prikupljena je krv sa EDTA od životinja odabranih za ispitivanje aktivnog i pasivnog imunskog odgovora, bris nosa i bris usta od životinja odabranih za ispitivanje aktivnog imunskog odgovora i hematofagni insekti sa 20 farmi odabranih za ispitivanje aktivnog imunskog odgovora (uzorkovani 4 puta tokom perioda ispitivanja). Specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa su dokazana 46/47 nedelja nakon vakcinacije kod 27 životinja (35,06%) korišćenjem virus neutralizacionog testa i kod 26 životinja (33,77%) testom indirektne imunofluorescencije i ELISA testom. Iako su posle revakcinacije broj pozitivnih životinja i titar antitela porasli, kod jednog broja životinja nije došlo do serokonverzije. Rezultati virus neutralizacionog testa su korišćeni za izračunavanje osetljivosti i specifičnosti ELISA testa i testa indirektne imunofluorescencije. Osetljivost ELISA test je iznosila 91%, a specifičnost 87% dok su karakteristike testa indirektne imunofluorescencije 85% osetljivost i 86% specifičnost. Niže vrednosti ELISA testa dobijene su poređenjem sa rezultatima dobijenim testom indirektne imunofluorescencije i iznosile su osetljivost 88%, a specifičnost 76%. Krvni serumi svinja seropozitivnih na Suipoxvirus reagovali su negativno na ELISA testu, a detektovane S/P% vrednosti su iznosile 0 i 1. Isptivanjem kolostruma ELISA testom, u 52,94% uzoraka je utvrđeno prisustvo specifičnih antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa. Kod 81,82% teladi čije su majke imale antitela u kolostrumu, 14. dana starosti detektovana su antitela u krvnom serumu komercijalnim ELISA testom. Ispitivanje uzoraka mleka ELISA testom rađeno je korišćenjem protokola proizvođača za krvni serum i plazmu i modifikacijom protokola. Za postavljeni uslov maksimalne specifičnosti, najoptimalnija S/P% granična vrednost za ispitane uzorke mleka je bila ≥10. Korišćenjem ove granične vrednosti osetljivost ELISA testa je iznosila 51% protokolom proizvođača i 63% modifikovanim protokolom. U 99,4% uzoraka mleka krava poreklom iz Savezne Republike Nemačke nisu dokazana specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa. Metodom Real-Time PCR u ispitanim uzorcima nije ustanovljeno prisustvo genoma vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa. Prema rezultatima dobijenim u ovoj studiji detekcija specifičnih antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa je moguća 46/47 nedelja nakon vakcinacije. Pored određenog broja seronegativnih životinja nakon revakcinacije je uočen pozitivni efekat revakcinacije. Za ispitivanje aktivnog i pasivnog imunskog odgovora ELISA test se najbolje pokazao. Pored toga što je komercijalni ELISA test namenjen za detekciju specifičnih antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa iz krvnih seruma i plazme, sa uspehom su detektovana i specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa u mleku i kolostrumu. Odsustvo detekcije nukleinske kiseline vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa dodatno opravdava primenu vakcinalne kampanje. PB - Univerzitet u Beogradu, Fakultet veterinarske medicine T2 - 2019 T1 - Ispitivanje imunskog odgovora i prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi nakon vakcinacije atenuiranom vakcinom UR - https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_veterinar_3378 ER -
@phdthesis{ author = "Milovanoviić, Milovan M.", year = "2019", abstract = "Nodularni dermatitis (ND) je akutno, subakutno ili hronično virusno oboljenje goveda i bivola. Prvi slučaj nodularnog dermatitisa u Srbiji je laboratorijski potvrđen 07.06.2016. godine. Najviše žarišta je bilo registrovano u Pčinjskom okrugu. Za sprečavanje širenja bolesti, celokupna populacija goveda je vakcinisana živom atenuiranom vakcinom od Neethling soja (OBP, Južnoafrička Republika). Cilj ove doktorske disertacije je ispitivanje aktivno i pasivno stečenog imunskog odgovora protiv virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi metodom virus neutralizacionog testa (VNT), tehnikom indirektne imunofluorescencije (IFAT) i komercijalnim ID Screen® Capripox double antigen Multi-species-ELISA testom proizvođača IDvet (Monpelje, Francuska). Pored seroloških ispitivanja, kod vakcinisanih životinja ispitivano je i prisustvo vakcinalnog i terenskog soja virusa metodom Real-Time PCR. Materijal za ispitivanje je sakupljen na teritoriji opštine Kraljevo u selu Vrdila, gde nije bilo prijavljenih slučajeva nodularnog dermatitisa. Uzorkovanje je sprovedeno tri puta u toku 2017. godine i to pre revakcinacije, mesec dana nakon revakcinacije i pet meseci nakon revakcinacije. Za ispitivanja aktivnog imunskog odgovora krvni serumi su sakupljeni od 79 životinja pre i mesec dana nakon revakcinacije i od 74 životinje pet meseci nakon revakcinacije. Za utvrđivanje specifičnosti ELISA testa ispitani su krvni serumi od 20 svinja seropozitivnih na Suipoxvirus. Pasivni imunski odgovor je ispitan pregledom krvnog seruma i kolostruma od 17 krava (na dan teljenja) i krvnog seruma od 20 teladi (0. i 14. dana starosti). Za ispitivanje karakteristika ELISA testa za ispitivanje mleka sakupljeno je pojedinačno i zbirno mleko od krava u laktaciji i to od 52 krave sa 12 gazdinstava pre revakcinacije, od 49 krava sa 11 gazdinstava mesec dana nakon revakcinacije i od 53 krave sa 15 gazdinstava pet meseci nakon revakcinacije. Kao negativna kontrola u cilju validacije ELISA testa ispitano je mleko od 352 krave sa teritorije Savezne Republike Nemačke. Za detekciju prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa prikupljena je krv sa EDTA od životinja odabranih za ispitivanje aktivnog i pasivnog imunskog odgovora, bris nosa i bris usta od životinja odabranih za ispitivanje aktivnog imunskog odgovora i hematofagni insekti sa 20 farmi odabranih za ispitivanje aktivnog imunskog odgovora (uzorkovani 4 puta tokom perioda ispitivanja). Specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa su dokazana 46/47 nedelja nakon vakcinacije kod 27 životinja (35,06%) korišćenjem virus neutralizacionog testa i kod 26 životinja (33,77%) testom indirektne imunofluorescencije i ELISA testom. Iako su posle revakcinacije broj pozitivnih životinja i titar antitela porasli, kod jednog broja životinja nije došlo do serokonverzije. Rezultati virus neutralizacionog testa su korišćeni za izračunavanje osetljivosti i specifičnosti ELISA testa i testa indirektne imunofluorescencije. Osetljivost ELISA test je iznosila 91%, a specifičnost 87% dok su karakteristike testa indirektne imunofluorescencije 85% osetljivost i 86% specifičnost. Niže vrednosti ELISA testa dobijene su poređenjem sa rezultatima dobijenim testom indirektne imunofluorescencije i iznosile su osetljivost 88%, a specifičnost 76%. Krvni serumi svinja seropozitivnih na Suipoxvirus reagovali su negativno na ELISA testu, a detektovane S/P% vrednosti su iznosile 0 i 1. Isptivanjem kolostruma ELISA testom, u 52,94% uzoraka je utvrđeno prisustvo specifičnih antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa. Kod 81,82% teladi čije su majke imale antitela u kolostrumu, 14. dana starosti detektovana su antitela u krvnom serumu komercijalnim ELISA testom. Ispitivanje uzoraka mleka ELISA testom rađeno je korišćenjem protokola proizvođača za krvni serum i plazmu i modifikacijom protokola. Za postavljeni uslov maksimalne specifičnosti, najoptimalnija S/P% granična vrednost za ispitane uzorke mleka je bila ≥10. Korišćenjem ove granične vrednosti osetljivost ELISA testa je iznosila 51% protokolom proizvođača i 63% modifikovanim protokolom. U 99,4% uzoraka mleka krava poreklom iz Savezne Republike Nemačke nisu dokazana specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa. Metodom Real-Time PCR u ispitanim uzorcima nije ustanovljeno prisustvo genoma vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa. Prema rezultatima dobijenim u ovoj studiji detekcija specifičnih antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa je moguća 46/47 nedelja nakon vakcinacije. Pored određenog broja seronegativnih životinja nakon revakcinacije je uočen pozitivni efekat revakcinacije. Za ispitivanje aktivnog i pasivnog imunskog odgovora ELISA test se najbolje pokazao. Pored toga što je komercijalni ELISA test namenjen za detekciju specifičnih antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa iz krvnih seruma i plazme, sa uspehom su detektovana i specifična antitela protiv virusa nodularnog dermatitisa u mleku i kolostrumu. Odsustvo detekcije nukleinske kiseline vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa dodatno opravdava primenu vakcinalne kampanje.", publisher = "Univerzitet u Beogradu, Fakultet veterinarske medicine", journal = "2019", title = "Ispitivanje imunskog odgovora i prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi nakon vakcinacije atenuiranom vakcinom", url = "https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_veterinar_3378" }
Milovanoviić, M. M.. (2019). Ispitivanje imunskog odgovora i prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi nakon vakcinacije atenuiranom vakcinom. in 2019 Univerzitet u Beogradu, Fakultet veterinarske medicine.. https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_veterinar_3378
Milovanoviić MM. Ispitivanje imunskog odgovora i prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi nakon vakcinacije atenuiranom vakcinom. in 2019. 2019;. https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_veterinar_3378 .
Milovanoviić, Milovan M., "Ispitivanje imunskog odgovora i prisustva vakcinalnog i terenskog soja virusa nodularnog dermatitisa kod goveda i novorođene teladi nakon vakcinacije atenuiranom vakcinom" in 2019 (2019), https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_veterinar_3378 .